1ª edição
9786555501278
Sinopse
Este livro foi elaborado por ex-alunos e colaboradores do Grupo NUCEL de Terapia Celular e Molecular da USP, com o objetivo de facilitar a compreensão e aplicação da técnica revolucionária de Edição Genética CRISPR/Cas9.
Na parte introdutória, abordamos desde a descrição inicial do locus CRISPR (do inglês Clustered Regularly Interspaced Palindromic Repeats) até a descoberta do mecanismo de funcionamento e o desenvolvimento de formas adaptadas deste sistema para edição gênica direcionada e precisa do genoma de diversos organismos.
Em seguida, apresentamos, detalhadamente, o passo a passo de como realizar uma edição gênica de maneira prática e confiável, através do sistema CRISPR/Cas9.
Mari Cleide Sogayar
Professora Titular Colaboradora do Departamento de Bioquímica do Instituto de Química da Universidade de São Paulo e Coordenadora do Grupo NUCEL de Terapia Celular e Molecular. Mestre pela Universidade da California. Doutorado em Bioquímica pela Universidade de São Paulo.
Saiba maisMariele Santos Moraes-Almeida
Licenciada em Ciências, com ênfase em Química, pela Universidade Federal de São Paulo. Mestre em Biotecnologia pelo Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo.
Saiba maisHenrique César Jesus-Ferreira
Licenciado e Bacharel em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Mestre em Bioquímica e Biologia Molecular pela Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Doutor em Bioquímica pela Universidade de São Paulo.
Saiba maisCamila Leal-Lopes
Bacharel em Química pela Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. Doutora em Bioquímica pela Universidade de São Paulo. Cientista associada ao New Mexico Consortium.
Saiba maisAna Claudia Oliveira Carreira
Pesquisadora Colaboradora da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo e do Grupo NUCEL de Terapia Celular e Molecular. Doutorado em Bioquímica pela Universidade de São Paulo; Bacharel e Licenciada em Ciências Biológicas pela Universidade Federal de São Carlos.
Saiba maisRaquel Arminda Carvalho Machado
Licenciada e Bacharel em Ciências Biológicas pela Universidade Federal de Viçosa. Mestre em Ciências pelo Instituto Federal de Tecnologia Suíça. Doutora em Bioquímica pela Universidade de São Paulo.
Saiba maisSumário
Silenciamento e Edição Gênica
Sistema de Edição Gênica CRISPR/CAS9
Etapa 1 - Início da Edição Gênica: Escolha do Alvo, da Estratégia de Edição Gênica e Desenho dos RNAS Guias (gRNAS)
Etapa 2 - Produção dos Plasmídeos Recombinantes: Digestão e Desfosforilação do Plasmídeo, Anelamento e Fosforilação dos RNAS Guias e Reação de Ligação ao Vetor
Etapa 3 - Minipreparação de DNA dos Plasmídeos Recombinantes: Eletroporação de Bactérias, Minipreparação Bacteriana e Digestão dos Plasmídeos Recombinantes
Etapa 4 - Confirmação do Plasmídeo Recombinante: Preparo de Amostras de DNA Plasmideal Para Sequenciamento e Análise dos Cromatogramas
Etapa 5 - Geração das Linhagens Celulares Nocauteadas: Transfecção de Células 293T, Titulação Viral, Cálculo da Multiplicidade de Infecção (M.O.I) e Transdução da Célula-Alvo
Etapa 6 - Confirmação da Edição Gênica (Nocauteamento): Ensaio Surveyor, Ensaio por Tide, PCR Quantitativo em Tempo Real (QRT-PCR), PCR Genômico, Western-Blotting e Sequenciamento de Sanger
Referências
Autores
Detalhes do livro
- Tipo: eBook
- ISBN: 9786555501278
- DOI: 10.5151/9786555501278
- Ano da Edição: 2022